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折疊濾芯微濾膜酶活性的測定

時間：2018-10-12 11:31 點擊量：次

折疊濾芯微濾膜酶活性的測定
常常利用同位素示蹤法來測定參與生物高分子合成的酶活性，即利用標記小分了底物和酶保溫，然后把放射性的小發(fā)子(底物)和放射性大分子(產(chǎn)物)分開。這一般用酸或有機溶劑沉淀來完成(沉淀蛋白質一般用三氯醋酸，沉淀核酸常用過氯酸)。這里在，用微孔濾膜過濾可以簡便快速地把沉淀產(chǎn)物完全收集在濾膜上，然后充分洗滌除去未摻入的小分子放射性底物，最后干燥濾膜，直接溶于閃爍液中進行均相測定或懸浮在閃爍液中進行非均相測定。降解大分子的酶也可以用微孔濾膜技術來測定活性。例如測定DNA內切酶活性時，用酸沉淀法不夠滿意，因為產(chǎn)物中也包括較大分子的寡核苷酸，而它也和酸不溶性底物一起沉淀出來，為了精確測定核酸內切酶活性，酶反應混合物直接用Schleicher&Schuell廠生產(chǎn)的A型硝酸纖維素酯濾膜過濾，它只滯留大分子而不滯留寡核苷酸，能把產(chǎn)物和底物分離得比較徹底，結果是比較滿意的。
在原則上，凡是能把一種放射性前體轉移或摻入到一種能選擇性沉淀形式產(chǎn)物的酶中，都能用微孔濾膜技術測定活性。
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